(주)셀세이프

제품 FAQ

• Q
  BioMycoX® Mycoplasma PCR Detection Kit와 BioMycoX® Mycoplasma PCR Detection Premix의 차이점은 무엇인가요?
  A

  위의 질문에 대한 답변은 아래와 같습니다. 

  1) BioMycoX® Mycoplasma PCR Detection Kit(Master Mix type) : Polymerase, Reaction buffer, dNTP 등의 재료가 2X로 농축되어 있는 혼합물의 형태
  2) BioMycoX® Mycoplasma PCR Detection Premix(Premix type) : 2X PCR Master Mix와 Primer를 8-strip에 분주하여 동결건조한 형태

• Q
  이 제품을 사용하여 식품의약품안전처의 인허가를 받는 것이 가능한가요?
  A

  아니요. 불가능합니다. 이 제품은 연구용에 적합한 제품으로, 민감도가 10~100 copies/reaction 입니다. 식품의약품안전처에서는 10CFU/mL이하를 검출할 수 있어야 한다는 기준을 제시하고 있기 때문에 MycoQSearch™ 제품군이나 HiSense™ Mycoplasma PCR Detection Kit 제품이 인허가에 적합한 제품입니다.

• Q
  민감도가 좋은 검출 키트를 사용해야하는 이유가 있나요?
  A

  민감도가 낮은 검출 키트를 사용하거나, 일반적인 Primer를 직접 합성하여 사용하거나, 형광 염색법 키트를 사용하는 방법 등은 마이코플라스마 오염 정도가 낮을 경우 검출하지 못합니다. 이러한 위음성 결과는 오염이 되어 있어도 인지하지 못하고 계속 세포 배양이나 후속실험을 진행하기 쉬우며, 마이코플라스마 오염이 점차 퍼져나갈 가능성이 높습니다. 따라서 민감도가 좋은 검출 키트를 사용해야 낮은 수준의 오염도 정확하게 식별할 수 있고, 마이코플라스마가 오염되지 않은 상태에서 안심하고 실험을 진행할 수 있습니다.

• Q
  마이코플라스마 밴드만 보이고 내부대조군(IAC) 밴드가 보이지 않는 이유가 무엇인가요?
  A

  마이코플라스마 오염이 심한 경우, 내부대조군(IAC) 밴드가 보이지 않을 수도 있습니다. 두 개의 밴드가 경쟁적관계로 설계된 제품으로, 마이코플라스마 밴드가 진하게 나타날수록 내부대조군(IAC)밴드가 연하게 나타나게 됩니다. 따라서, 마이코플라스마 밴드만 나타나는 경우에도 PCR이 정상 진행되었다고 판단하시면 됩니다.

• Q
  Positive Control DNA 밴드가 보이지 않는 이유는 무엇인가요?
  A

  Positive Control 증폭은 정상적인 시험 진행 여부를 확인하는 역할이기에 항상 2개의 밴드가 증폭되어야 합니다. 정상적인 PCR반응이 이뤄졌다 하더라도, Positive Control DNA를 Vortexing하거나, 상온에 장시간 노출하는 경우 등은 DNA가 분해되어 정상적인 밴드가 나타나지 않을 수 있습니다. Positive Control DNA를 여러번 냉/해동하여 이용하는 경우에는 안정적인 시험을 위해 소분하여 사용하는 것을 권장하고 있습니다

• Q
  샘플에서 밴드가 하나도 보이지 않습니다. 이유가 무엇인가요?
  A

  세포배양액에 PCR 저해 물질(높은 EDTA농도, 높은 FBS 농도, 단백질 등)이 있는 경우 PCR이 정상적으로 진행되지 않습니다. Wash 과정을 추가하시거나 Genomic DNA extration kit를 이용하여 샘플 준비 하시는 것을 권장드립니다.

• Q
  샘플 준비 방법은 어떻게 되나요?
  A

  샘플 준비 방법은 크게 2가지 방법이 있습니다.

  1) Boiling Method : 세포 배양액을 98℃로 heating하여 간단하게 마이코플라스마 오염을 확인할 수 있습니다.
  2) Genomic DNA extraction Method : Genomic DNA extraction kit로 cell에서 gDNA를 추출하여 마이코플라스마 오염을 확인하는 방법으로 정확한 오염 정도를 확인 할 수 있습니다.

• Q
  Positive Control DNA의 농도는 어느정도 인가요?
  A

  Positive Control DNA에 대한 농도나 종류 등에 대한 정확한 정보 제공은 어렵습니다. 또한, PCR밴드의 두께, qPCR결과의 Ct값 등은 시험 환경이나 장비 등 여러 요인에 따라 달라질 수 있기에 정확한 범위가 정해져 있지 않습니다.

• Q
  이전 실험의 PCR 산물로 인한 위양성이 뜨는 것 같은데 해결 방법이 있나요?(Carryover contamination 해결방법)
  A

  해당 제품은 2X PCR Master Mix에 dTTP 대신 dUTP가 포함되어 UDG 시스템이 적용되었으며, 아래와 같은 내용으로 해결이 가능합니다.

  1) dUTP가 포함된 PCR 산물(amplicon)에 UNG(Uracil-N-glycosylase, 키트에는 불포함)를 처리
  2) UNG는 dUTP가 포함된 DNA 부분의 uracil-glycosidic 결합을 hydrolysis하여 PCR산물의 재증폭 방지
  3) UDG 시스템은 dTTP가 포함된 주형 DNA는 완전하게 유지되면서 캐리-오버 오염(carry-over contamination)을 방지(UDG=UNG)